神经环路运用（31）丨宽场荧光成像技能

  宽场荧光成像（Wide-Field Fluorescence Microscopy, WF-Fluorescence）是一种大范围的运用于生物学和医学研讨中的显微成像技能。它经过激起样本中的荧光符号物并捕捉其发射的荧光信号来生成图画。

  1. 激起光源：一般运用汞灯、氙灯或LED作为激起光源，这些光源能够给咱们供给多种波长的光以习惯不一样的荧光染料。

  发射滤光片：过滤掉未被荧光分子吸收偏重新发射的布景光，只允许特定波长的荧光经过。

  3. 探测器：一般运用CCD或CMOS相机捕捉荧光信号，并将其转换为数字图画。

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  Fig1 对 Thy1-YFPH 转基因小鼠脑切片进行宽场荧光成像，明晰分辩出神经元胞体及其轴突结构，验证了体系在固定样本中的高分辩率成像才能

  进一步在活体试验中，运用470 nm激起波长进行Ca²⁺动态成像、561 nm进行形态学成像，成功同步记载了多达3804个表达GCaMP6f的神经元和4650个表达mCherry的星形胶质细胞。

  该宽场显微镜具有多色兼容性、单细胞分辩率和高通量成像才能，不仅可明晰解析精密神经结构，还能高效捕获大规模细胞集体活动，明显提高方针感兴趣区域的快速定位与导航功率。

  成像速度快：一次曝光即可获取整个视场图画，无需逐点扫描，合适捕捉快速动态进程（如钙信号、神经活动）和进行长时间活体成像。

  大视场掩盖：可一起调查毫米级范围内的数千个细胞，完成高通量、集体水平的剖析，十分合适于全脑切片或大面积皮层成像。

  体系结构相对比较简单、本钱较低：比较共聚集或双光子显微镜，宽场体系光学途径简练，保护便利，设备本钱和运用门槛更低。

  多色兼容性强：经过切换滤光片组或运用多通道LED光源，可轻轻松松完成多荧光符号的一起或替换成像（如GCaMP与mCherry）。

  光毒性低、合适活体长时间观测：激起光均匀照耀，总光强一般低于点扫描技能，对活细胞损害小，有利于坚持样本生理状况。

  易于与行为试验整合：轻量化规划和高速收集才能使其便于与动物行为设备结合，用于清醒动物的在体功用成像。

  适用场景：大规模神经元活动记载、脑片结构成像、药物挑选、发育生物学动态追寻等。

  因缺少光学切片才能，深层安排成像易受散射和布景荧光搅扰，分辩率低于共聚集或超分辩技能。

  综上，宽场荧光成像是速度、通量与实用性之间高度平衡的技能，在需求“看得快、看得广”的研讨中具有无法代替的优势。

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