空间组学样本制备攻略 骨髓安排样本怎样制备？

  这份骨髓安排空转制备试验流程攻略来救场，逐过程拆解要害操作，让您的研讨少走弯路！

  （1）样本收集骨髓安排 “新鲜度” 是 RNA 质量的要害，样本离体后需 30 分钟内完结固定，根绝 RNA 降解！小鼠样本需取股骨、胫骨等部位，沿冠状面或矢状面切开以露出骨髓；人骨髓安排样本则要侧重重视安排厚度，避免影响固定液浸透作用。

  （2）固定环节引荐运用 4% 多聚甲醛做固定，其纯度高、布景信号低，不只能削减安排缩短，对脂肪和各类酶的固定作用也更优，特别适配免疫荧光、荧光原位杂交等精密试验。

  特别留意：固定后需用流水冲刷过夜，完全去除残留固定液，为后续操作扫除搅扰。

  （3）脱钙处理骨髓安排含钙化成分，脱钙是成功切片的根底，主张选用 0.5M EDTA（pH7.5）温文脱钙，4℃条件下结合磁力拌和或摇床处理 3-14 天，期间每 2-3 天替换一次脱钙液。脱钙结尾判别：用尖镊子或针尖轻戳安排，若能轻松扎透或安排显着变软，即可中止脱钙，避免过度处理损害安排。

  （4）脱水与包埋脱水过程需用梯度乙醇（50%-100%）逐渐处理，其间 70% 乙醇可在 4℃下过夜；95%、100% 等高浓度乙醇则需严厉把控处理时刻，避免安排变脆影响后续切片。包埋时按惯例白腊包埋流程操作，但要分外留意骨髓安排的摆放方向，保证切片时能完好露出方针研讨区域。

  （1）切片厚度骨髓安排切片易脱片，主张将厚度控制在 4μm（惯例 FFPE 样本多为 5μm），既能下降脱片危险，又能保证基因捕获功率，统筹试验稳定性与数据质量。

  DV200界说：以长度＞200 核苷酸的 RNA 片段占比来衡量，可直观反映 RNA 的完好程度。规范：合格线%，一旦低于该数值，后续试验主张暂停或从头制备样本。

  “优先看护 RNA”：从固定到脱钙的全流程，都要把削减 RNA 损害放在第一位，DV200 作为中心方针，有必要严厉把控；

  脱片问题重道破：切片厚度、防脱载玻片选择、操作时的轻柔程度，这一些细节是保证数据完好的要害；

  流程调整要灵敏：根据样本类型（小鼠 / 人）、试验方针（惯例检测 / 精密剖析）适配办法，别生搬硬套模板。

  骨髓安排空间转录组试验虽有应战，但吃透这些流程和技巧，就能让研讨事半功倍！保藏这份攻略，下次试验直接照着操作，用高质量数据为你的科研加分！

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